EGCG对高糖环境下小鼠足细胞增殖和P21Cip1、P27Kip1表达的影响

摘要

目的:研究作为绿茶主要活性成分的EGCG对高糖环境下足细胞增殖和周期素激酶抑制剂P21Cip1和 P27Kip1表达的影响,从而探讨其作用机制.方法:以高糖(25 mmol/L)培养的小鼠足细胞为研究对象,维生素E为对照,以不同浓度EGCG(0.2,10,100 μmol/L)培养24 h、48 h、72 h,首先以相差显微镜观察足细胞形态改变;其次,以Brdu ELISA法检测细胞增殖;流式细胞仪分析足细胞G1/G0、 S期、G2/M期百分比;RT-PCR检测细胞周期依赖型蛋白激酶抑制剂P21Cip1mRNA和P27Kip1mRNA表达.结果:(1)相差显微镜下观察,高糖刺激后24 h,部分足细胞脱落,呈不规则形态.(2)Brdu ELISA法以正常糖为对照,高糖刺激24 h后,足细胞增殖无统计学差异,48 h和72 h后足细胞增殖减少,有统计学差异(P<0.05);以高糖组为对照,高糖刺激24 h,维生素E组和维生素E+EGCG协同作用组促进足细胞增殖有统计学差异(P<0.05),EGCG(0.2,10,100 μmol/L)作用组无统计学意义;48 h实验结果和24 h相同;72 h EGCG(100 μmol/L)维生素E组和维生素E+EGCG协同作用组促进足细胞增殖作用有统计学差异(P<0.01).(3)不同浓度EGCG对高糖刺激后足细胞周期G1/G0期、S期、G2/M期百分比无统计学差异(P>0.05).(4)RT-PCR高糖刺激后24 h,足细胞P21Cip1mRNA表达有上升,但无统计学意义(P>0.05);随EGCG浓度增加,以维生素E为对照,P21Cip1mRNA表达无统计学差异(P>0.05).正常糖组为对照,高糖刺激后24 h足细胞P27Kip1 mRNA表达上调,有统计学差异(P<0.01),随EGCG浓度增加,P27Kip1 mRNA表达无统计学差异(P>0.05).结论:EGCG(100 μmol/L)作用72 h促进高糖环境下足细胞增殖,对细胞周期作用不明显,高糖刺激后24 h足细胞P27Kip1 mRNA表达上调,EGCG对足细胞细胞周期依赖型蛋白激酶抑制P21Cip1mRNA和P27Kip1表达无明显影响,提示EGCG促高糖环境下足细胞增殖作用可能还存在其他机制.