益气活血软坚解毒方对荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡相关基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax、P53、NF-κB表达的影响

摘要

目的:研究益气活血软坚解毒(YHRJ)方对荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡调控基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax、P53、NF-κB表达的影响.方法:将动物分组为NS组(正常对照组)、DDP组(顺铂组)、YHRJ等效剂量组、YHRJ高剂量组、YHRJ等效剂量+DDP组、YHRJ高剂量+DDP组,应用免疫组化、原位杂交、RT-PCR等方法对用药后的荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡主要相关基因Fas、FasL、Bcl-2、Bax、P53、NF-κB蛋白与mRNA表达进行检测.结果:免疫组化检测结果显示:与NS组比较,各加药组均能增高Fas、Bax基因蛋白表达(均P＜0.01),均能降低NF-κB蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01)及降低突变型P53基因蛋白表达(P＜0.01).与NS组比较,YHRJ等效剂量+DDP组能明显降低FasL基因蛋白表达(P＜0.01).与DDP组比较,中药组及中药含DDP组能明显降低FasL及突变型P53基因蛋白表达(均P＜0.01).与DDP组比较,YHRJ等效剂量组、YHRJ高剂量组、YHRJ高剂量+DDP组能降低NF-κB蛋白表达(均P＜0.01).与DDP组比较,YHRJ高剂量组及中药含DDP组明显增高Bax基因蛋白表达(均P＜0.01).与NS组与DDP组比较,中药组及中药含DDP组能明显降低Bcl-2基因蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01).原位杂交检测NF-κB mRNA表达结果:与NS组及DDP组比较,YHRJ等效剂量组及中药含DDP组明显降低NF-κB mRNA表达(均P＜0.01).RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达结果:与NS组及DDP组比较,YHRJ等效剂量组能明显增高Bax基因 mRNA表达(均P＜0.001).与NS组比较,各加药组能明显降低Bcl-2 mRNA表达(P＜0.05或P＜0.001);与DDP组比较,YHRJ高剂量组能明显降低Bcl-2 mRNA表达(P=0.01).结论:YHRJ方能够提高荷H22615小鼠肝癌细胞凋亡促进基因Fas、Bax表达,减低细胞凋亡抑制基因FasL、Bcl-2表达,降低细胞凋亡保护基因突变型P53蛋白与NF-κB基因表达,这些作用是诱导肝癌细胞凋亡的分子基础.