RNAi检测大鼠转酮酶基因在肝癌细胞系SMMC-7721增殖中的作用

摘要

目的:观察不同中医治法对肝癌大鼠TKT(转酮酶)基因表达的调控差异,以及TKT基因在人肝癌细胞增殖中的作用.方法:①采用DEN(二乙基亚硝胺)诱发大鼠肝癌,分别经健脾理气、清热解毒、活血化瘀等中药治疗后,Affymetrix rat 230A 基因芯片检测大鼠肝癌组织TKT基因表达的差异;②设计3个人TKT基因siRNA(小干扰RNA)序列,将siRNA经脂质体转入SMMC-7721人肝癌细胞株,MTT(噻唑蓝)比色法检测细胞生长增殖情况、RTqPCR(实时荧光定量聚合酶链反应)检测该基因的表达差异.结果:①芯片结果显示,TKT基因在大鼠肝癌形成后表达显著增加,不同中药对其具有不同程度的下调作用,其中健脾理气法下调作用较明显;②采用MTT比色法筛选到1个TKT基因RNAi(RNA干扰)有效靶序列,转染48小时后细胞的生长增殖得到了明显的抑制(与阴性对照组相比,P<0.01);③RTqPCR检测表明,转染48小时后该基因的表达明显降低.结论:TKT基因的高表达与肝癌细胞恶性增殖有关,而中药健脾理气治法对其具有下调作用.