超声微泡介导微小RNA-146a基因在缺血/再灌注肝损伤大鼠中的表达与作用

摘要

目的 评价肝组织微小RNA-146a(miR-146a)表达与大鼠缺血/再灌注(I/R)肝损伤的关系.方法 按随机数字表法将144只SD大鼠分为对照组(N组)、假手术组(S组)及I/R组,各组再分为4个亚组(n=12),分别在实验前1 h静脉给予220μL生理盐水(A组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL生理盐水(B组)、20μL miR-146a模拟剂+200μL超声微泡造影剂(C组)、20μL miR-146a抑制剂+200μL超声微泡造影剂(D组).通过制备载miR-146a的超声微泡造影剂,运用超声靶向破坏微泡,于实验前及实验后24 h检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织miR-146a表达,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)、IL-6、TNF-α蛋白表达,光镜下观察肝组织细胞损伤情况.结果 实验前各组以及实验后24 h N组和S组血浆ALT、IL-6、TNF-α含量差异均无统计学意义,病理观察也无明显肝组织细胞损伤.实验后24 h,与S组比较,I/R A组和D组肝组织miR-146a表达显著下降(miR-146a/U6 snRNA:0.51±0.13、0.22±0.09比1.01±0.02,均P<0.01),血浆ALT、IL-6、TNF-α含量及肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α表达量显著升高〔ALT(U/L):103.23±26.64比44.16±18.55,176.46±7.26比49.74±6.83;IL-6(μg/L):64.28±16.19比17.68±7.54,88.49±3.23比15.58±2.38;TNF-α(μg/L):31.28±2.57比5.58±3.35,59.12±8.74比5.27±1.37;TLR4/GAPDH:2.43±0.36、3.23±0.71比0.96±0.24;IRAK-1/GAPDH:2.34±0.52、3.14±0.63比0.76±0.21;IL-6/GAPDH:1.02±0.22、1.11±0.16比0.98±0.37;TNF-α/GAPDH:2.05±0.48、2.86±0.27比0.59±0.16;均P<0.01〕,且以I/R D组升高更为显著(均P<0.01);病理显示肝组织细胞损伤明显;而I/R B组和C组转染miR-146a模拟剂后肝组织miR-146a表达量显著升高(miR-146a/U6 nsRNA:1.56±0.31、2.40±0.53比1.01±0.02,均P<0.01),肝组织TLR4、IRAK-1、IL-6、TNF-α的表达量显著下降(TLR4/GAPDH:0.77±0.18、0.65±0.27比0.96±0.24,IRAK-1/GAPDH:0.61±0.14、0.47±0.20比0.76±0.21,IL-6/GAPDH:0.80±0.13、0.54±0.22比0.98±0.37,TNF-α/GAPDH:0.41±0.14、0.16±0.03比0.59±0.16,均P<0.01),且以C组结合超声微泡后表达更为显著(P<0.01),病理显示肝组织细胞损伤也更为轻微,B组和C组血浆ALT、IL-6及TNF-α含量也与S组差异无统计学意义.结论 超声微泡能高效转染miR-146a模拟剂和抑制剂于肝组织细胞;miR-146a可能负调控TLR信号通路介导的I/R肝损伤.