肥大细胞在细菌鞭毛蛋白引起的肠T84细胞单层损伤中的作用

摘要

目的 探讨细菌鞭毛蛋A对肠黏膜屏障影响及肥大细胞在肠黏膜屏障损伤中作用.方法 在Transwell小室内共同培养T84细胞单层和肥大细胞(HMC-1),模拟肠黏膜屏障,并向培养系统中加入细菌鞭毛蛋白.通过测量不同条件下T84细胞单层的跨上皮电阻(TER)值和辣根过氧化酶(HRP)通过率,分析肠黏膜屏障完整性;使用免疫细胞化学实验检测T84细胞对细菌鞭毛蛋白的摄取;使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测基底层培养基中经T84细胞转运的细菌鞭毛蛋白含量,以及HMC-1细胞分泌的组胺和类胰蛋白酶β2(MCT)的水平.结果 较低浓度(≤8mg/L)的细菌鞭毛蛋白对T84细胞单层的相对TER值以及HRP通过率无显著影响;当细菌鞭毛蛋白浓度>8mg/L,随着细菌鞭毛蛋白浓度的增加T84细胞单层的相对TER值逐渐下降,HRP通过率逐渐增加.免疫细胞化学结果显示,和正常对照组相比,细菌鞭毛蛋白组T84细胞的胞质被染成棕褐色.ELISA结果提示细菌鞭毛蛋白组基底侧细菌鞭毛蛋白吸光度A值明显高于正常对照组,并且各组组胺浓度和MCT水平与各组细菌鞭毛蛋白HRP通过率的结果保持一致.结论 细菌鞭毛蛋白可直接破坏T84细胞单层或经T84细胞摄取并转运到达基底侧,激活HMC-1细胞,使其释放组胺及类胰蛋白酶β2,增强T84细胞单层肠黏膜屏障的损伤.