人肠上皮细胞类器官三维培养体系的建立

摘要

目的 构建人肠上皮细胞类器官三维培养体系。方法 采用含2 mmol/L乙二胺四乙酸的分离液分离肠镜活检标本或手术标本肠黏膜的隐窝,并用基质胶包埋隐窝后覆盖富含生长因子的培养液。光镜下观察记录类器官生长情况,并采用免疫组织荧光及核酸原位杂交分析检测肠上皮及类器官成熟细胞及干细胞标记物的表达情况。分别采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷染色法和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法标记增殖或凋亡的细胞。结果 隐窝细胞包埋于基质胶内培养4 ～ 5 d可形成类器官结构,第8天消化重新包埋后可继续生长。核酸杂交法显示类器官富含Lgr5阳性细胞。撤去Wnt3a、R-Spodin、SB202190、Nicotinamide 5 d后类器官细胞可分化成Fabp1阳性细胞、Muc2阳性细胞、Chga阳性细胞、Lyz阳性细胞。类器官可见增殖细胞,细胞凋亡少见。结论 该培养体系可成功构建人肠上皮细胞类器官,可为研究肠道疾病肠上皮病理生理机制提供可靠的体外研究模型。