博莱霉素对大鼠肺微血管内皮细胞紧密连接改变及Cx43表达变化的影响

摘要

目的观察博莱霉素（BLM）造模大鼠肺微血管内皮细胞（EC）紧密连接及Cx43表达的变化特征,探讨其在肺纤维化发生中的作用和意义。方法健康SD大鼠随机分为对照组和实验组每组20只,采用ELISA法测定对照组和实验组第3、7、14、28天血浆血管性假血友病因子（vWf）水平。对采血后的大鼠,分别在第3、7、14、28天行硝酸镧灌注,制作肺组织病理标本,用透射电镜观察血管EC紧密连接及镧颗粒分布;采用组织块培养法行肺微血管EC体外培养,用激光共聚焦显微镜观察Cx43表达。结果各实验组大鼠血清中vWf水平均高于对照组,以第3天最高,差异有统计学意义（P＜0.01）。对照组EC结构完整,EC间连接紧密,未见镧盐颗粒通过EC间的紧密连接。实验组均可见EC连接间隙增宽,并有高密度的镧盐颗粒在细胞连接间隙中线状沉淀。实验组Cx43阳性反应的范围及强度均明显减弱,第3、7、14、28天Cx43蛋白的荧光反应强度及表达阳性率（25%、38%、45%、71%）,均明显低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论EC紧密连接呈持续开放状态,导致炎性细胞渗出及与之相应的细胞因子分泌持续增加,启动成纤维细胞增殖过度可能是BLM诱发肺间质结构发生异常改变的重要病理基础。