人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化

摘要

目的:核凋亡诱导因子1(Nuclear apoptosis-inducing factor 1, NAIF1)是本实验室首次克隆和鉴定的新凋亡基因,为了通过Polldown实验研究其结合蛋白,在大肠杆菌中表达和纯化人重组NAIF1(73-327)的截短体.方法:通过PCR方法扩增出NAIF1(73-327)cDNA,并插入pGEX-KG载体,实现插入基因的融合表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS/MS)检测分析.结果:DNA测序结果证实成功构建了重组融合表达质粒pGEX-KG- NAIF1(73-327),并在大肠杆菌中稳定表达,表达产物分子量约为53 kD,与预期一致,表达量约占菌体总蛋白的22%,纯化蛋白经Western blot和二级质谱(MS/MS)分析证明表达蛋白为GST-NAIF1(73-327)融合蛋白.结论:获得了重组GST-NAIF1(73-327)融合蛋白的高效表达,为下阶段NAIF1的结构与功能研究打下了基础.