一个新的负性调控元件对乙型肝炎病毒X启动子启动作用的调节

摘要

目的在前期工作已证实HBV基因中的250～453nt为一个新的负性调控元件的基础上,探讨其对HBV X启动子（XP）启动作用的影响。方法构建含250～453nt的HBV X启动子驱动虫荧光素酶表达的质粒pNRE-XP,与表达海肾荧光素酶的质粒RL-TK共转染人肝癌HepG2细胞,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶表达,RT-PCR检测虫荧光素酶基因mRNA水平的表达,并与相应对照组进行比较。同时,在含HBV全基因组的质粒LJ196上通过缺失突变的方法除去250～453nt片段,将其与反式提供C、P蛋白的质粒LJ96共转染HepG2细胞,RT-PCR检测X基因mRNA表达,并与对照组比较。结果该负性调控元件存在时,HepG2细胞中虫荧光素酶活性明显低于对照组;逆转录聚合酶链反应中虫荧光素酶基因mRNA表达也低于相应的对照组。在LJ196上突变掉250～453nt后,X基因表达量高于对照组。结论该负性调控元件可下调HBV XP的启动作用,在HBV基因组上缺失掉该片段后XP驱动下的基因表达增加。