5-氟尿嘧啶对肝癌细胞系BEL-7402中肿瘤干细胞的富集作用

摘要

目的探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）对肝癌细胞系BEL-7402细胞的作用,并对免于5-FU杀伤的存活细胞进行干细胞表面标志物的检测和"肝癌干细胞"的细胞生物学鉴定。方法检测5-FU作用前后BEL-7402细胞增殖能力、细胞周期和细胞表面标志物CD56、CD54、上皮细胞黏附分子（EpCAM）和CD133表达率的变化;通过集落形成实验检测CD56、CD54、EpCAM、CD133阳性细胞和阴性细胞的克隆形成能力并对其进行比较。两组间均数比较采用t检验,两组数据间构成比比较采用x~2检验。结果5-FU对BEL-7402细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。10μg/m15-FU作用48 h后,G0/G1期细胞比例由对照组的57.50%±0.98%升高至实验组的68.70%±3.41%（P＜0.05）;S期细胞比例由对照组的40.26%±4.12%下降至实验组的31.80%±4.15%（P＜0.01）;实验组G2/M期细胞消失,对照组该期细胞比例为5.80%±1.87%（P＜0.01）。细胞周期分布变化明显,差异具有统计学意义。5-FU处理使BEL-7402细胞中CD56、CD54、EpCAM和CD133阳性细胞比例分别由0.57%±0.12%,8.10%±6.79%,0.3%±0.01%,3.20%±0.99%升高至4.13%±0.06%,50.08%±1.69%,0.55%±0.07%,10.51%±1.13%,差异具有统计学意义（P＜0.05）。软琼脂集落形成实验中,CD56、CD54、EpCAM、CD133阴性细胞与阳性细胞的成集落比例分别为2.11%±0.21%,3.32%±0.31%;0.86%±0.101%,2.40±0.52%;7.19%±0.56%,7.73±0.71%;2.70%±0.26%,5.75%±0.81%。各组阳性细胞集落形成率与阴性细胞比较,均有明显增加,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论一定剂量的5-FU能够富集肝癌细胞系BEL-7402中的肿瘤干细胞;同EpCAM和CD133一样,CD56和CD54单阳性细胞比其各自单阴性细胞具有更强的克隆形成能力,这提示CD56和CD54可能成为肝癌干细胞的分子标志物。