下调miR-20 a靶向负调控ZNF259抑制肺癌H322细胞侵袭迁移并诱导凋亡

摘要

目的 探讨miR-20a对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响和机制.方法 Realtime PCR方法分别检测miR-20a在正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中的表达变化.在肺癌H322细胞中转染miR-20a inhib-itor,四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western印迹检测ZNF259、C-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、C-Caspase-9、MMP-9蛋白表达变化.靶基因预测软件预测ZNF259可能为miR-20a的靶基因,利用双荧光素酶活性系统鉴定靶向关系.在肺癌细胞中共转染miR-20a inhibitor、ZNF259 siRNA,同样使用上述方法测定细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力变化,评估ZNF259 siRNA对下调miR-20a调控肺癌细胞的影响.结果 肺癌细胞A549、Spc-A1、H322中miR-20a的表达水平明显高于正常肺上皮细胞BEAS-2B,且H322细胞中miR-20a的表达水平最高.miR-20a inhibitor能够下调肺癌细胞中miR-20a的表达水平,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡,促进细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达,减少细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达.荧光素酶活性鉴定结果显示,ZNF259为miR-20a的靶基因,且下调miR-20a提高肺癌细胞中ZNF259蛋白表达水平.ZNF259 siRNA可以逆转下调miR-20a后的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡变化.结论 下调miR-20a靶向负调控ZNF259抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡.