Klotho蛋白促进内皮祖细胞旁分泌和分化的作用及机制研究

摘要

目的 探讨Klotho蛋白促进内皮祖细胞(EPC)旁分泌和分化的作用及机制.方法 选取健康人外周血分离培养EPC,分为对照组、Klotho组、AKT阻断组及ERK阻断组(n=6).采用流式细胞术检测其表型;ELISA方法检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子(SDF1)和碱性成纤维生长因子(bFGF)水平;MTT检测内皮细胞增殖率;划痕实验检测内皮细胞的迁移;流式细胞术检测EPC向CD31阳性内皮细胞的分化.结果 EPC培养到第7天后,CD34的阳性率为93.6％,VEGF受体2的阳性率为94.9％.与对照组比较,Klotho组、AKT阻断组及ERK阻断组内皮细胞增殖率、内皮细胞划痕区域闭合率、CD31阳性细胞比例更高(P＜0.05,P＜0.01);AKT阻断组VEGF、SDF1、bFGF表达明显低于Klotho组和ERK阻断组[(46.44±4.62)ng/ml vs (70.29±5.87) ng/ml和(65.21±4.69)ng/ml;(16.56±2.03)ng/ml vs(37.84±3.53)ng/ml和(34.29±3.72)ng/ml;(5.09±1.40)ng/ml vs (7.52±2.61) ng/ml和(7.36±2.18) ng/ml,P＜0.05].与Klotho组比较,AKT阻断组内皮细胞增殖率、划痕区域闭合率及CD31阳性细胞比例显著降低[(29.81±2.55)％ vs(43.37±4.29)％,(29.41±3.46)％ vs(56.56±6.42)％,(7.08±1.11)％vs (23.91±3.69)％,P＜0.01].结论 Klotho蛋白能够通过AKT信号通路,促进EPC旁分泌和分化,进而促进血管生成.