miR-376a-3p通过靶向调控GRP78抑制胃癌细胞生长与转移的机制研究

摘要

目的 探讨miR-376a-3p通过靶向调控GRP78抑制胃癌细胞生长与转移的机制。方法 qRT-PCR测定临床胃癌组织与细胞系中miR-376a-3p的表达,并分析miR-376a-3p与胃癌患者预后的关系;双荧光素酶报告基因系统与Western blotting验证miR-376a-3p与GRP78的靶向调控关系,同时检测临床胃癌组织中GRP78蛋白质的表达情况;分别采用Pre-miR-376a、pcDNA-3.1-NC与pcDNA-3.1-GRP78转染MKN45细胞系,CCK-8与EdU实验测定细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染实验检测细胞凋亡情况,划痕愈合实验与Transwell实验测定细胞迁移能力,Western blotting测定细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达水平。结果 与正常胃黏膜细胞系GES-1相比,胃癌细胞系(MKN45、AGS、GC9811、HGC27)中miR-376a-3p表达水平显著降低(P<0.05),且miR-376a-3p低表达患者预后更差(P<0.05);miR-376a-3p靶向抑制GRP78蛋白质的表达(P<0.05);上调miR-376a-3p表达能抑制MKN45细胞增殖、迁移及EMT(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),而同时上调miR-376a-3p与GRP78的表达则能逆转此现象(P<0.05)。结论 miR-376a-3p通过靶向抑制GRP78蛋白表达抑制胃癌细胞生长与转移,提示miR-376a-3p/GRP78分子轴是胃癌可能的诊断和治疗靶标。