利用CRISPR/Cas9技术抑制Gp96的表达对小鼠酒精性肝纤维化过程中α-SMA和TGF-β1表达的影响

摘要

目的 研究小鼠酒精性肝纤维化进程中,利用CRISPR/Cas9技术抑制Gp96的表达对小鼠肝脏中 α-SMA和TGF-β1表达的影响.方法 健康雄性C57BL/6J小鼠220只,随机分为4组.正常对照组(n=10),生理盐水+酒精诱导纤维化组(n=70),尾静脉注射质粒Gp96-sgRNA3+酒精诱导肝纤维化组(n=70),腹腔注射NF-κB抑制剂PDTC+酒精诱导肝纤维化组(n=70).于酒精诱导第8周眼球取血处死各组小鼠,测定血清谷丙转氨酶(ALT);天狼猩红染色检测各组胶原纤维变化;免疫印迹(Western blotting)检测 α-SMA和TGF-β1表达变化.结果 与正常对照组相比,其余三组ALT显著上升(P<0.01),胶原纤维显著增加(P<0.01),α-SMA和TGF-β1表达显著升高(P<0.01),肝纤维化加重;与生理盐水+酒精诱导肝纤维化组相比,尾静脉注射质粒Gp96-sgRNA3+酒精诱导肝纤维化组和腹腔注射NF-κB抑制剂PDTC+酒精诱导肝维化组的ALT上升更为明显(P<0.01),胶原纤维增加更显著(P<0.01),α-SMA和TGF-β1表达提升更显著(P<0.01),提示肝纤维化加剧更显著.结论 小鼠酒精性肝纤维化进程中,Gp96可能通过下调 α-SMA和TGF-β1的表达来减轻肝纤维化程度,而NF-κB信号通路通过上调Gp96的表达进而抑制 α-SMA和TGF-β1的表达,起到减轻肝纤维化的作用.