RNA干扰抑制二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1基因表达对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭的影响

摘要

目的 观察小干扰RNA(siRNA)抑制二磷酸腺苷(ADP)核糖化因子鸟苷酸激酶1基因(ASAP1)表达对膀胱癌T24细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 设计合成靶向ASAP1基因的siRNA,采用阳离子脂质体试剂瞬时转染膀胱癌细胞株T24,利用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测RNA干扰(RNAi)后ASAP1基因的沉默效果,评价siRNA设计的合理性及RNAi抑制ASAP1表达的有效性,分别在RNAi后1、2、3d应用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖状态,并绘制生长曲线;应用Transwell法检测各实验组膀胱癌细胞的侵袭能力.结果 靶向ASAP1的siRNA成功抑制膀胱癌细胞株T24中ASAP1 mRNA及蛋白表达,ASAP1-siRNA组mRNA相对表达量为空白对照组的13.5％,蛋白相对表达量为对照组的14.3％;MTT比色法结果显示ASAP1-siRNA组细胞增殖能力显著减弱(P＜0.05),在1、2、3d后重复检测,分别达到了同时间空白对照组的76.3％、59.1％和51.4％;Transwell小室迁移实验结果表明,ASAP1被抑制后,膀胱癌穿膜细胞数明显减少[(49.5±10.4)个比(122.6±14.2)个,P＜0.05],侵袭能力降低.结论 应用siRNA技术能有效抑制ASAP1基因的表达,同时有效抑制T24细胞的体外增殖和侵袭能力.