组蛋白去乙酰化酶2调节Nrf2乙酰化水平在脂多糖诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制

摘要

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylases,HDAC2）调节核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2）乙酰化水平在脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的抗氧化作用机制。方法 常规培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,用不同浓度的LPS（10、100、1 000 ng/mL）刺激,分别在0、6、12、24及48 h时用CCK-8检测细胞活性,选择合适的浓度和时间点。常规培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,随机分为对照组、LPS组、HDAC2慢病毒干扰组（siRNA-HDAC2组）和HDAC2慢病毒过表达组（LV-HDAC2组）。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HDAC2和Nrf2蛋白表达水平,免疫共沉淀法检测Nrf2乙酰化水平,放线菌酮作用后检测Nrf2稳定性。化学比色法检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）活性。采用SPSS 23.0统计软件,多组间比较采用单因素方差分析检验,组间两两比较采用LSD-t检验。结果 与对照组相比,LPS组HDAC2的蛋白表达水平升高（t=5.974,P=0.027）,Nrf2乙酰化水平降低（t=7.223,P=0.002）,Nrf2蛋白水平升高（t=2.929,P=0.043）,Nrf2的蛋白稳定性升高,SOD活性下降（t=121,P＆0.01）,MDA含量升高（t=10.45,P=0.000 5）。与LPS组相比,过表达HDAC2后Nrf2乙酰化水平降低（t=11.29,P=0.000 4）,Nrf2蛋白表达水平升高明显（t=3.194,P=0.033）,Nrf2的蛋白稳定性升高,SOD活性升高（t=4.678,P=0.009）,MDA含量下降（t=5.417,P=0.005 6）,而下调HDAC2后呈现相反的趋势。结论 LPS刺激后Ⅱ型肺泡上皮细胞氧化应激加重,HDAC2可降低Nrf2乙酰化水平,提高Nrf2蛋白表达,减轻LPS引起的氧化应激。