原核表达并纯化沙眼衣原体(Ct)巨噬细胞感染增强因子MIP的免疫活性分析

摘要

目的 原核表达并纯化沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)巨噬细胞感染增强因子MIP,评价其作为Ct疫苗候选蛋白的可行性.方法 采用PCR技术从Ct D型基因组中扩增MIP基因,构建pGEX-6p-1/MIP原核表达质粒,转化E.coli XLl-Blue,IPTG诱导重组GST-MIP融合蛋白表达,经酶切后得到无GST标签的纯蛋白免疫Balb/c鼠,ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体和脾细胞因子的产生情况.结果 成功构建了pGEX-6p-1/MIP原核表达质粒,序列测定证实重组质粒插入片段与GenBank登陆的Ct D型一致,长度为729 bp;GST-MIP融合蛋白在E.coli中获得稳定高效表达,纯化后纯度达90％以上;MIP蛋白免疫小鼠产生高滴度、高特异性的IgG抗体,以IgG2a亚型为主;MIP蛋白免疫小鼠的脾细胞受衣原体菌体或MIP蛋白刺激,产高水平IFN-γ.结论 原核表达并纯化了Ct MIP蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,可诱导小鼠产生高滴度抗体和Thl型免疫应答,可能为潜在有效的Ct亚单位疫苗.