特异性下调热休克蛋白A12B加重脂多糖诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞损伤

摘要

目的 通过特异性下调脂多糖(LPS)诱导细胞炎症大鼠腹主动脉内皮细胞(RAAEC)热休克蛋白A12B(HSPA12B)的表达,观察不同表达水平HSPA12B对RAAEC生物学特性的影响,探讨HSPA12B对脓毒症内皮功能调控的潜在机制.方法 使用针对HSPA12B mRNA序列设计的siRNA转染RAAEC,构建LPS诱导细胞炎症模型.分三组,即空白对照组(RAAEC+20％DMEM培养基)、LPS模型组(RAAEC+20％DMEM培养基+1 mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液)、LPS+siRNA转染组(基因转染后RAAEC+1 mL PBS将1 mg LPS溶解后的溶液).观察各组RAAEC中HSPA12B mRNA及蛋白表达水平的变化,使用透射电子显微镜观察内皮细胞形态及内部超微结构形态改变,采用酶联免疫吸附法测定内皮细胞内皮素-1(ET-1)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)含量变化.结果 LPS+siRNA转染组HSPA12B mRNA及蛋白水平与LPS模型组比较均明显下调(P<0.05),透射电子显微镜下观测到LPS+siRNA转染组细胞膜呈虫蚀样变,胞质内空泡明显增多,线粒体肿胀变性.与空白对照组比较,LPS模型组、LPS+siRNA转染组ET-1含量增高(pg/mL:405.28±37.95 vs.1141.18±115.27 vs.1487.09±108.18,P<0.05),且LPS+siRNA转染组高于LPS模型组(P<0.05);与空白对照组比较,LPS+siRNA转染组eNOS含量降低(μU/g:1687.98±81.38 vs.940.16±50.79 vs.658.37±55.06,P<0.05),且LPS+siRNA转染组低于LPS模型组(P<0.05).结论 特异性下调LPS诱导RAAEC细胞炎症大鼠HSPA12B的表达,能降低RAAEC对炎症反应的耐受能力,加重RAAEC损伤程度.