利用Pdl1敲除的巨噬细胞转录谱分析结核感染中PD-L1作用相关的候选基因

摘要

目的分析结核菌(Mtb)感染的程序性死亡配体1(Pdl1)特异性敲除的巨噬细胞(MΦ)转录谱变化,筛选MΦ内PD-L1作用相关的候选基因。方法构建敲除小鼠(Pdl1^Flox/-),通过Cre-loxp技术培育出MΦ上Pdl1特异性敲除的纯合和杂合小鼠(Pdl1^Flox/Flox-Cre,Pdl1^Flox/--Cre),用PCR和流式细胞术验证。分离上述小鼠腹腔MΦ,利用转录组测序技术检测Mtb感染MΦ24 h的表达谱,以同窝阴性小鼠(Pdl1^Flox/Flox)为对照,进行生物信息学分析。结果PCR和流式细胞术证实小鼠敲除成功。纯合、杂合及同窝阴性小鼠感染前后相比,差异表达基因最显著富集项为参与免疫反应和免疫过程的GO(P<0.01;P<0.01),筛出17个PD-L1相关的候选基因。通过KEGG富集分析,最显著富集的通路有Toll样受体、NF-κB信号通路等(P<0.01;P<0.01),筛出6个候选基因。结论通过转录谱分析,确定与免疫反应及免疫过程有关的Ccl2、Qa5、Il12a等17个基因,免疫及炎症相关代谢通路的Ptgs2、Cd40、Card11等6个基因为Mtb感染的MΦ内PD-L1相关的候选基因,除Il6外均为本研究新筛选的候选基因。