超顺磁性脂质体载血管内皮细胞生长因子沉默基因对骨肉瘤细胞影响

摘要

目的探讨超顺磁性脂质体载血管内皮细胞生长因子(VEGF)沉默基因对骨肉瘤细胞影响。方法制备磁性脂质体,检测脂质体磁性和Zeta电位,透射电镜观察脂质体形态。骨肉瘤细胞143B分成空白对照组(常规培养)、阴性对照组(磁性脂质体转染siRNA control)、Lip 2000-VEGF组(Lipofectamine 2000转染siRNA VEGF)、MCLs组(磁性脂质体转染siRNA VEGF)。噻唑蓝(MTT)法检测增殖,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测VEGF mRNA,蛋白质印迹(Western blot)法检测VEGF蛋白表达,流式细胞术测定凋亡,划痕愈合实验检测划痕愈合能力,Transwell小室检测侵袭和迁移。结果随着磁场强度的不断增加,磁性脂质体磁化强度也明显增加;磁性脂质体Zeta电位测定结果为正电位。脂质体呈圆形或椭圆形,分布均匀,分散性较好。空白对照组、阴性对照组、Lip 2000-VEGF组、MCLs组VEGF mRNA表达水平为1.00±0.01,1.05±0.03,0.43±0.02,0.24±0.01,VEGF蛋白表达水平为1.00±0.01,1.03±0.01,0.66±0.02,0.46±0.02;细胞光密度值(增殖活性)为1.97±0.12,2.01±0.21,1.51±0.12,0.96±0.10;凋亡率为(4.97±0.06)%,(6.25±0.09)%,(12.08±0.11)%,(21.15±0.12)%;划痕愈合率为(95.43±0.21)%,(86.10±0.21)%,(45.25±0.09)%,(26.69±0.20)%;细胞迁移数目为(1241.33±3.51),(1154.67±8.14),(736.33±6.43),(416.00±7.00)个;细胞侵袭数目为(986.33±5.03),(1007.33±8.02),(574.67±12.90),(248.33±7.51)个。上述指标,Lip 2000-VEGF组、MCLs组与Control比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);MCLs组与Lip 2000-VEGF组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论超顺磁性脂质体载VEGF沉默基因抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。