尖尾芋多糖的提取纯化及其免疫活性研究

摘要

目的 从中药尖尾芋中分离提纯出多糖,鉴定其理化性质并对其免疫活性进行研究。方法 通过苯酚-硫酸法和Bradford法分别测定尖尾芋水提物中总多糖和总蛋白的含量。经过水提、Sevag法除蛋白、透析、醇沉等步骤将尖尾芋粗多糖提取出来,并通过DEAE-52和Sephadex G-200柱层析纯化多糖。对纯化多糖进行理化检识,并采用薄层色谱法分析其单糖组成。进行尖尾芋多糖(polysaccharide of Alocasia cucullata,PAC)诱导THP-1细胞分化实验;采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定5,10,20,40,80,160,320,640和1 280μg·mL^(-1) PAC对小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞活性的影响。结果 尖尾芋水提物中糖和蛋白含量百分比分别为67.89%和7.40%。纯化多糖的纯度较高,为白色固体,易溶于水,属于非淀粉类多糖,不含游离单糖、多酚、糖醛酸和蛋白质,其由D-葡萄糖和D-半乳糖组成。PAC可诱导THP-1细胞分化。PAC作用于小鼠腹腔巨噬细胞48 h的结果显示,80和160μg·mL^(-1)的PAC处理组的光密度(optical density,OD_(570))分别为(18.24±0.57)×10^(-2)和(17.16±0.49)×10^(-2),均显著高于对照组的(13.46±0.37)×10^(-2),差异均有统计学意义(均P<0.001)。PAC作用于小鼠脾细胞48 h后,40μg·mL^(-1)的PAC处理组的OD_(570)为(16.97±0.19)×10^(-2),明显高于对照组的(15.42±0.22)×10^(-2)(P<0.05),80,160,320,640和1 280μg·mL^(-1)的PAC处理组的OD_(570)分别为(18.14±0.42)×10^(-2),(18.58±0.98)×10^(-2),(20.68±0.61)×10^(-2),(20.12±0.22)×10^(-2)和(18.38±0.57)×10^(-2),均显著高于对照组的(15.42±0.22)×10^(-2),差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论 多糖是尖尾芋水煎液的主要成分,可以通过除蛋白、透析、醇沉、柱层析的方法将其提取纯化。尖尾芋多糖具有激活THP-1单核细胞、增强巨噬细胞代谢活力和刺激淋巴细胞增殖的免疫活性。