二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的机制制

摘要

目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的.笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G_2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C(Celldivision cycle protein25C,Cdc25C)、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G_2/M期,但G_2/M期阻滞的机制还未完全阐明.本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的可能机制.方法:RT-PCR检测Chk1和Chk2在mRNA水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC823细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3相关基因(ATM-RAD3-related gene,ATR)、细胞周期检查点蛋白激酶1(checkpoint kinase1,Chk1)、细胞周期检查点蛋白激酶2(checkpoint kinase2,Chk2)表达和ATR、chk1、Chk2的磷酸化程度;免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与Cdc25C结合情况.结果:RT-PCR检测显示,Chk1和Chk2的mRNA水平在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05).Western blot检测显示,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/L DADS刺激BGC823细胞2h后,处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.05),而Chk2磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05).15mg/L DADS作用15～120min,ATR磷酸化程度明显增加.呈时间依赖性(P<0.05),而ATR表达无改变.免疫共沉淀分析表明,DADS能促进BGC823细胞Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响.结论:DAD诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞与Chk1的活化有关,DADS可能是通过激活ATR、Chk1,调节Cdc25C的表达引起人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞.