抗GPC3/CD3双特异性重链抗体的制备及其抗肝癌作用评价

摘要

目的:设计并制备抗GPC3/CD3双特异性重链抗体(BiHcAb),分析其与双特异性T细胞衔接子(BiTE)在体内外抗肿瘤活性的差异.方法:通过全基因合成抗GPC3和抗CD3单域抗体(sdAb)序列,克隆至携带IgG4 Fc段的表达载体中,同时利用KIH技术形成稳定的双特异性重链抗体.2种质粒共转染HEK-293F细胞,悬浮摇瓶培养获得目的抗体.SDS PAGE和考马斯亮蓝染色确定相对分子质量.通过流式细胞术检测与GPC3阳性肿瘤细胞和外周血单个核细胞(PBMC)的结合能力.通过共培养检测BiHcAb介导的细胞杀伤效果及细胞因子释放;采用裸鼠异体移植模型实验检测BiHcAb的体内抑制肿瘤活性.结果:成功构建并表达抗GPC3/CD3 BiHcAb,相对分子质量约为100000,BiTE相对分子质量约为50000.抗GPC3/CD3 BiHcAb较BiTE对表达GPC3的肿瘤细胞具有更强的杀伤活性,同时促进释放更多的细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6),差异有统计学意义(P＜0.05).裸鼠体内实验显示抗GPC3/CD3 BiHcAb比BiTE具有更强的体内抑制肿瘤生长的作用,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功制备的抗GPC3/CD3 BiHcAb较BiTE在体内外具有更强的抗肝癌作用.