腺病毒介导的KDR启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞旁观者效应的实验研究

摘要

目的:研究腺病毒介导的血管内皮因子受体(KDR)启动子-胸苷激酶系统对血管内皮细胞的旁观者效应.方法: 采用新型腺病毒载体AdEasy系统,构建由KDR启动子调控的、腺病毒介导的、单纯疱疹病毒胸苷酸激酶基因系统(AdKDR-HSV-tk),在人胚胎肾细胞系293细胞中包装、扩增后,体外感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),建立HUVEC/tk转化细胞株.观察丙氧鸟苷(GCV)对HUVEC、 HUVEC /tk细胞的存活率及旁观者效应.结果:从病毒滴度及PCR检查,证实tk基因随病毒的感染已成功地导入293细胞及HUVEC细胞.HUVEC/tk细胞对丙氧鸟苷的敏感性显著高于亲代HUVEC细胞.HUVEC/tk及HUVEC+HUVEC/tk混合细胞还随丙氧鸟苷浓度的增加受到明显的抑制.HUVEC+HUVEC/tk混合细胞的存活率,随HUVEC/tk细胞比例的增加而降低,说明腺病毒介导的KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷系统不但能杀伤tk+细胞,也能杀伤未导入tk的细胞,存在明显的旁观者效应.结论: 腺病毒介导的KDR启动子单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷系统对血管内皮细胞具有明显的杀伤及旁观者效应.