大鼠PDGF-C基因全长及结构域编码蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要

目的:在大肠杆菌宿主系统中表达血小板衍生生长因子C(PDGF-C)基因全长编码的蛋白以及两个结构域编码的蛋白.方法:用PCR方法从已构建好的质粒中扩增出大鼠PDGF-C cDNA开放阅读框架片段(ORF-PDGF-C,1035bp),以及位于N端的CUB结构域(CUB-PDGF-C,333bp)和位于C端的生长因子结构域(GFD-PDGF-C,348bp),并重组入表达载体pET-24a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导PDGF-C融合蛋白的表达,经DS-PAGE,表达蛋白采用Western-blot用抗-His和抗-PDGF-C的抗体分别验证融合蛋白表达.结果:PCR扩增的PDGF-C基因序列与GenBank数据库中的序列一致;37℃,0.1 mmo·L-1IPTG诱导6h,pET-24a-ORF-PDGF-C,pET一24a-CUB-PDGF-C,pET-24a GFD-PDGF-C融合蛋白获得优化表达;Western-blot证实融合蛋白的特异性表达.结论:成功构建了pET-24a-ORF-PDGF-C,pET-24a-CUB-PDGF-C,pET-24a-GFD-PDGF-C重组质粒,并在大肠杆菌中获得有效表达,这为进一步纯化该基因表达蛋白以及研究其结构与功能奠定了基础.