焦磷酸测序技术快速鉴定体液病原菌方法的建立与应用

摘要

目的建立一套快速准确鉴定临床体液样本病原菌的方法学体系,评价其作为病原菌检测方法在临床检验中的应用价值。方法采用柱式抽提试剂盒抽提205份体液样本中病原菌基因组DNA,以细菌16S rRNA基因为目标序列,通用引物扩增高变区片段,以焦磷酸测序技术进行扩增子序列分析并与数据库中的序列进行比对和病原菌种属鉴定。同时采用传统的细菌培养-生化方法进行病原菌检测鉴定,并以此为金标准,采用SPSS 11.0软件计算焦磷酸测序法检测敏感度、特异度、假阳性率、假阴性率、阳性预测值、阴性预洲值、阳性似然比及阴性似然比,评价新方法的可行性与实用性。结果细菌培养阳性率为39.5%（81/205）,其中71例为单一病原菌感染,10例为双重混合感染;与培养-生化鉴定结果相比,焦磷酸测序检测鉴定单一病原菌感染样本结果符合率为100%（71/71）,鉴定双重混合感染样本10例中有7例符合。此外,对培养阴性的124例体液样本用焦磷酸测序检洲鉴定,结果10例为阴性,且均为单一细菌感染。以培养方法作为金标准,焦磷酸测序法鉴定体液病原菌敏感度达100%,特异度为91.9%,假阳性率为8.1%,假阴性率为0%,阳性预测值为89.0%,阴性预测值为100%,阳性似然比为12.4,阴性似然比为0。结论焦磷酸测序法直接检测鉴定临床体液样本中的病原菌具有快速、高敏感性、高准确率等优势,在临床病原微生物检测中具有很强的实用性和广阔的应用前景。