lncRNA MEG3对脂多糖诱导人牙髓干细胞衰老的影响

摘要

目的 探讨lncRNA母源性印记基因3(maternal imprinting gene 3,MEG3)通过调控ROCK1对LPS诱导人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)衰老的影响.方法 从成人牙髓中分离培养hDPSCs,采用10 ng/mL LPS刺激hDPSCs,分别刺激1次(6h)、3次(每次6h,48h1次)、6次(每次6h,24h1次),以生理盐水组为对照组.利用脂质体转染技术分别将lncRNA MEG3 shRNA(sh-MEG3)、sh-NC、ROCK1 siRNA(si-ROCK1)、pcDNA3.1-ROCK1(OE-ROCK1)、si-NC以及OE-NC转染进hDPSCs,构建过表达和沉默细胞模型.采用qRT-PCR法检测lncRNA MEG3的表达水平;Western blot法检测ROCK1和衰老相关蛋白p21和p53的表达水平;SA-β-gal染色检测hDPSCs衰老情况.结果 随着LPS刺激时间的延长,lncRNA MEG3、ROCK1、p53和p21的表达逐渐升高,LPS刺激6次组的表达水平均显著高于对照组(P<0.001).敲降lncRNA MEG3(sh-MEG3)或敲降ROCK1(si-ROCK1)均能下调LPS刺激hDPSCs 6次后ROCK1、p53和p21蛋白的表达水平(P<0.05),且减少了细胞中SA-β-gal阳性细胞数(P<0.01).同时敲降lncRNA MEG3且过表达ROCK1(sh-MEG3+OE-ROCK1)时,ROCK1、p53和p21的表达水平及SA-β-gal阳性细胞数在LPS刺激6次hDPSCs中均显著低于OE-ROCK1组(P<0.05).结论 敲降lncRNA MEG3可缓解LPS诱导hDPSCs衰老,其机制是通过下调ROCK1表达抑制衰老相关蛋白的表达.