丹参多酚通过减轻线粒体DNA氧化损伤抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

摘要

目的探讨丹参多酚减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制。方法 H9c2心肌细胞株来源于中国科学院细胞库。将H9c2心肌细胞分为4组, 即对照组（细胞在普通培养基中正常培养）、丹参多酚组[先用含有0.5 g/L丹参多酚的培养基预处理4 h（37 ℃）后换普通培养基正常培养]、H/R组（进行缺氧复氧处理）和丹参多酚+H/R组（先用含有0.5 g/L丹参多酚的培养基预处理4 h后再进行缺氧复氧处理）。检测各组心肌细胞的凋亡率、细胞内三磷酸腺苷（ATP）水平、线粒体膜电位的变化以及线粒体DNA氧化损伤情况。结果 （1）各组心肌细胞凋亡情况:H/R组Tunel阳性细胞率为（26.36±5.14）%明显高于对照组的（2.71±1.66）%（P=0.000 4）, 丹参多酚+H/R组Tunel阳性细胞率为（17.28±4.75）%, 虽高于对照组（P=0.003 9）, 却明显低于H/R组（P=0.012 8）。H/R组AnnexinⅤ及PI双阳性的细胞比率为（28.23±6.73）%明显高于对照组的（3.53±2.83）%（P=0.001 1）, 丹参多酚+H/R组AnnexinⅤ及PI双阳性的细胞比率为（18.10±4.56）%虽高于对照组（P=0.038 3）, 却明显低于H/R组（P=0.037 2）。（2）各组心肌细胞内ATP水平及线粒体膜电位:H/R组心肌细胞内ATP水平为（49.05±10.12）%明显低于对照组（100%）（P=0.000 5）, 而丹参多酚+H/R组心肌细胞内ATP水平为（68.67±13.32）%明显高于H/R组（P=0.019 9）。激光共聚焦显微镜下可见H/R组心肌细胞的红色荧光较对照组弱, 绿色荧光较对照组强, 酶标仪检测结果示H/R组心肌细胞中线粒体膜电位为（37.13±8.47）%明显低于对照组（100%）（P=0.000 1）。而丹参多酚+H/R组心肌细胞的红色荧光较H/R组强, 绿色荧光较H/R组弱, 酶标仪检测结果示丹参多酚+H/R组心肌细胞中线粒体膜电位为（63.77±12.32）%明显高于H/R组的（37.13±8.47）%（P=0.007 3）。（3）各组心肌细胞线粒体DNA氧化损伤情况:对照组及丹参多酚组心肌细胞中几乎未见绿色的8-OHdG表达, H/R组心肌细胞中绿色的8-OHdG表达则较多, 而且与代表线粒体的红色的MitoTracker Red重合。丹参多酚+H/R组心肌细胞线粒体内绿色的8-OHdG表达较H/R组少。结论丹参多酚可能是通过减轻线粒体DNA氧化损伤, 保护线粒体功能, 从而抑制心肌细胞凋亡, 最终减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。