细胞内活性氧及其DNA损伤产物在启动细胞癌变中的作用

摘要

目的:研究辐射(60Coγ射线照射)和化学致癌物4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶基)-1-丁酮4methylnitrosamino13pyridyl1butanone,NNK诱发细胞(BEP2D)产生的活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)对DNA氧化损伤及其在启动细胞癌变中的作用。方法:细胞内H2O2和O2分别用2′7′-二氯荧光黄双乙酸盐DCFHDA和氢化乙锭HE标记,用流式细胞法测定荧光产物2′7′-二氯荧光黄DCF和溴乙锭EB荧光强度;8-羟基脱氧鸟嘌呤(8hydroxydeoxygunosine,OH8dG)含量用高压液相色谱结合电化学方法HPLCECD测定;用脂质体包埋法将目标DNA(来自NNK处理和60Coγ射线照射的BEP2D细胞)转染到受体细胞(C3H10T1/2)中,并用G418筛选阳性克隆细胞;用半固体琼脂试验检测细胞转化能力;用裸鼠成瘤试验鉴定细胞恶性转化。结果:NNK和60Coγ射线可诱发BEP2D细胞内ROS水平及OH8dG含量显著增高,并显示出良好的剂量效应关系;NNK处理和60Coγ射线照射的BEP2D细胞DNA分别转染到C3H10T1/2受体细胞后,细胞出现转化特性,裸鼠成瘤试验为阳性。结论:辐射和化学致癌物诱发细胞产生的ROS增高及其对DNA的氧化损伤可能启动了细胞癌变。