Namalwa 12/MTX耐药株的建立及其耐药机理的初步研究

摘要

背景与目的:甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗恶性肿瘤已有50多年的历史,已发现其在不同类型的白血病中具有不同的耐药机制。根据不同的药物作用机制对白血病患者实施个体化用药,以使用药更规范、更科学,不断提高白血病疗效。但尚未见有关其在恶性淋巴瘤中耐药性的阐述,本研究旨在建立Burkitts淋巴瘤MTX耐药细胞株Namalwa12/MTX,并探讨其耐药机理。方法:经MTX脉冲式作用于野生型Namalwa细胞12次产生Namalwa12/MTX耐药株;用MTT法评判野生株及Namalwa12/MTX细胞株对MTX的药效差异;用RT-PCR检测二氢叶酸还原酶(DHFR)mRNA表达量;用3H-MTX掺入及β-液闪仪检测还原性叶酸载体(RFC)功能;用3H-MTX掺入结合HPLC分离法检测两细胞株形成MTX多聚谷氨酸(MTXPG)的能力。结果:Namalwa12/MTX细胞对MTX耐药性较Namalwa细胞提高了20多倍。此耐药性并非RFC功能不良所致,而与形成MTXPG的量密切相关。Namalwa野生株与耐药株Namalwa12/MTX形成的MTXPG1～6分别为(4453±236)pmol/109个肿瘤细胞及(1583±26)pmol/109个肿瘤细胞,MTXPG4～6分别占总MTXPG1～6的25.4%及5.5%(P<0.05);DHFRmRNA表达逐渐增高,并参与Namalwa12/MTX耐药性的形成。结论:MTXPG合成障碍及DHFRmRNA表达增高导致Namalwa12/MTX细胞株对MTX耐药。