脂质体介导FLICE抑制蛋白反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡

摘要

背景与目的:FLICE抑制蛋白基因在凋亡信号传递中发挥重要作用,研究靶向cFLIP的反义基因治疗药物可能为临床治疗胃癌提供新的方法和思路。本研究拟探讨cFLIP反义寡核苷酸对人胃癌细胞株BGC823凋亡的影响。方法:以脂质体Lipofectame2000为载体,介导cFLIP反义寡核苷酸片段导入胃癌细胞株BGC823。RT-PCR和Westernblot方法检测cFLIPL/SmRNA和蛋白在HeLa、BGC823细胞中的表达;以cFLIP基因翻译起始区为靶点,人工合成20个碱基全硫代修饰的反义寡核苷酸,脂质体介导转染BGC823细胞后,MTT法检测细胞抑制率;原位末端标记、流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测蛋白表达变化。结果:cFLIPmRNA的2种拼接体和表达蛋白在HeLa、BGC823细胞中呈阳性表达。MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖,其抑制作用随浓度增加而增强;TUNEL检测可见阳性染色;流式细胞仪分析发现在G1峰前出现凋亡峰;Westernblot检测可见cFLIPL和cFLIPS蛋白表达显著下降。结论:cFLIPL/SmRNA和蛋白在HeLa、BGC823细胞中表达。脂质体介导反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制cFLIPL/S蛋白表达,促进凋亡。