应用蛋白印迹-免疫沉淀-质谱法筛选卵巢癌肿瘤抗原

摘要

背景与目的:肿瘤抗原的筛选对卵巢癌的早期诊断有重要意义.目前,噬菌体抗体库技术(phage antibody library)、核糖体展示技术(ribosome display)和血清学筛选重组cDNA表达文库(serological analysis of recombinant cDNA expression libraries,SEREX)技术等作为常用的肿瘤抗原筛选方法已得到广泛应用.本研究采用蛋白印迹-免疫沉淀-质谱方法筛选和鉴定卵巢癌肿瘤抗原,以期建立一种新的筛选肿瘤抗原的方法及技术路线.方法:应用蛋白印迹(Western blot)法筛选出差异明显的卵巢癌患者血清,用该血清与SKOV3细胞裂解物反应,免疫沉淀富集抗原,与正常血清的免疫沉淀样品比较,获得差异蛋白条带,然后进行质谱鉴定、生物信息学分析.结果:采用蛋白印迹筛选到标记为7号的卵巢癌患者血清,与其他血清比较有明显的差异,经免疫沉淀、聚丙烯酰胺凝胶电泳与正常血清免疫沉淀样品比较,发现在接近66.2 ku的位置处有一差异蛋白条带,经质谱鉴定、生物信息学分析为热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70及细胞角蛋白(cytokeratin)9.结论:采用蛋白印迹-免疫沉淀-质谱法进行卵巢癌肿瘤抗原的筛选和鉴定是一种行之有效的方法.