NT4p53(N15)Ant融合基因重组腺病毒的构建及其体外抑瘤作用

摘要

背景与目的:有研究发现P53氨基端15肽与穿膜肽(antennapedia,Ant)的融合肽能迅速穿透细胞膜.直接、快速引起乳腺癌、胰腺癌细胞坏死而非凋亡.但对正常细胞几乎没有毒性.本研究构建缺陷型腺病毒载体表达NT4p53(N15)Ant融合基因,研究其体外抑瘤作用.方法:应用Ad-EasyTM系统,在大肠杆菌同源重组,构建NT4p53(N15)Ant腺病毒表达载体,在HEK-293细胞内成功包装并鉴定后,感染肝癌细胞株HepG2,用倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态学变化、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验及培养基中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)测定研究其体外抑瘤作用.结果:Ad-NT4p53(N15)Ant对肝癌细胞株HepG2有明显抑制作用,48、72、96 h细胞存活率分别为36.67%、20.47%、17.82%,与空病毒处理组比较差异有统计学意义(P＜0.05);电镜观察到感染的HepG2细胞胞膜、核膜破坏,胞浆内出现囊泡状物质,染色质聚集.Ad-NT4p53(N15)Ant 处理HepG2细胞24、48、72、96 h时培养液中LDH释放分别为94、236、267、313 U/L,较空病毒处理组明显增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论:构建的腺病毒载体Ad-NT4p53(N15)Ant感染HepG2细胞后能抑制细胞增殖.