分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用

摘要

背景与目的:已有研究表明从人胎盘中提取纯化的人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor,hRI)对小鼠某些实体肿瘤的生长具有明显的抑制作用。本研究的目的是构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri,并观察其对小鼠B16黑色素瘤生长的抑制作用。方法:将合成的小鼠IgG信号肽碱基序列与hRI基因序列连接后,重组到逆转录病毒载体V-pLNCX上构建分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri。将PA137细胞用于病毒包装,NIH3T3细胞用于测定病毒滴度。采用RT-PCR和Western blot法检测hRI基因的表达。构建小鼠荷B16黑色素瘤模型,注射V-pLNCX-s-hri,同时用生理盐水、V-pLNCX和V-pLNCX-hri作为对照,用肿瘤组织重和微血管密度来评价V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑素瘤生长的抑制作用。采用ELISA方法测定B16细胞培养上清和小鼠血清中RI含量。结果:V-pLNCX-s-hri对培养的B16细胞的感染效率为38.5%。在感染V-pLNCX-s-hri后的B16细胞中检测到RI mRNA和蛋白的表达。感染后的B16细胞的培养上清中hRI的含量为0.228μg/mL。V-pLNCX-s-hri组小鼠外周血中RI的含量为0.249μg/mL,明显高于生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组的0.035μg/mL、0.028μg/mL和0.169μg/mL(P值均<0.01)。生理盐水组、V-pLNCX组和V-pLNCX-hri组小鼠的瘤组织重分别为(1.90±1.12)g、(1.77±0.21)g和(1.10±0.46)g,显微镜下每10个视野的微血管平均数分别为89±6、87±7和41±8;而V-pLNCX-s-hri组的瘤组织重为(0.82±0.34)g,血管平均数为34±4。V-pLNCX-s-hri组与各对照组相比,其瘤组织重和血管数量的差异都有统计学意义(P值均<0.01)。结论:构建的分泌性表达载体V-pLNCX-s-hri能对B16细胞进行有效的感染,且在感染的B16细胞中分泌性高表达。V-pLNCX-s-hri对小鼠B16黑色素瘤的生长有明显的抑制作用,且效果优于V-pLNCX-hri。