抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

目的 制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性.为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备.方法 将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达栽体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白.表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆.重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性.结果 构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致.纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(M_r)32 000的表达蛋白条带.获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10~(-3),小鼠腹水效价为10~(-5),抗体亚型均为IgG_1.RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应.Western blot结果显示在M_r 32 000处可见1条单一目的条带.结论 获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础.