泛素交联酶UBE2D3在调节人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性中的作用

摘要

目的 研究泛素交联酶UBE2D3(ubiquitin-conjugating enzyme E2D3)在端粒酶介导的放射敏感性调节机制中的作用.方法 针对UBE2D3基因序列,设计3条干扰序列,通过筛选选取1条干扰效率最优的序列并合成pshRNA-UBE2D3;在MCF-7细胞中,转染过表达质粒pEGFP-UBE2D3以及干扰质粒pshRNA-UBE2D3,Western blot检测UBE2D3对hTERT蛋白表达的影响;通过转染pEGFP-hTERT,Western blot法检测hTERT蛋白表达对UBE2D3的影响;通过转染pshRNA-UBE2D3抑制UBE2D3的表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测MCF-7细胞周期的变化,CCK-8法检测MCF-7细胞增殖情况,克隆形成法检测MCF-7细胞放射敏感性的变化.结果 成功筛选出一条针对UBE2D3的最优干扰序列,干扰UBE2D3能显著降低MCF-7细胞的放射敏感性;UBE2D3能参与hTERT调控放射敏感性的调节,抑制UBE2D3的表达可能通过上调hTERT和Cyclin D1的表达、增加hTERT的活性、加速G1期向S期转变以及提高MCF-7细胞的增殖从而降低MCF-7细胞的放射敏感性.然而,过表达UBE2D3未能检测到hTERT的表达差异.结论 抑制UBE2D3可能通过上调hTERT以及Cyclin D1的表达参与hTERT调节的放射敏感性的过程.