黄芪甲苷通过调控肾素原受体-自噬途径改善嘌呤霉素诱导肾足细胞骨架损伤的作用研究

摘要

目的:探讨肾素原受体(prorenin-receptor,PRR)及自噬在嘌呤霉素诱导的肾足细胞骨架损伤中的作用及黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)的改善机制.方法:体外培养人肾足细胞株AB8/13,30μg/ml嘌呤霉素(puromycin,PAN)孵育0～48 h后,免疫印迹法检测足细胞PRR蛋白表达.PRR siRNA干扰足细胞48 h,PAN干预24 h,检测PRR及自噬蛋白(LC3II,P62)表达,免疫荧光法检测细胞骨架.分化后足细胞分为对照组、PAN组(30μg/ml)、PAN(30μg/ml)+不同剂量AS-IV干预组(5μg/ml,25μg/ml,50μg/ml)孵育48 h,免疫荧光法检测各组细胞骨架蛋白F-actin、synaptopodin表达,免疫印迹法检测各组synaptopodin、PRR、LC3II、P62蛋白表达.结果:PRR在PAN刺激早期表达升高,24 h达峰,48 h显著下降.PRR小RNA干扰后,足细胞PRR表达下调、LC3Ⅱ表达下调,但自噬抑制相关蛋白P62显著升高,骨架损伤提前发生;低中高剂量AS-IV均可改善嘌呤霉素诱导的足细胞变构,其中低、中剂量(5μg/ml,25μg/ml)AS-IV改善最明显,AS-IV干预后较PAN组PRR蛋白显著升高,LC3Ⅱ蛋白表达上调,P62表达下调,synaptopodin表达上调.结论:PRR可能通过介导自噬在PAN诱导的肾足细胞损伤中发挥保护作用,低中剂量AS-IV可能通过提高PRR、稳定自噬发挥肾足细胞保护作用.