粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合骨髓间充质干细胞对新生大鼠高体积分数氧肺损伤的影响

摘要

目的 探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)联合骨髓间充质下细胞(MSCs)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤的影响.方法 采用贴壁选择法分离,培养、扩增大鼠骨髓来源MSCs,并以BrdU进行标记.注射前以PBS按要求剂量稀释;3日龄清洁级SD新生大鼠32只,置于950 mL/L氧环境下7 d,随机分为4组,每组8只;高氧加GM-CSF加mMSCs(联合组).高氧加GM-CSF(GM-CSF组),高氧加mMSCs(MSCs组),高氧对照组(对照组).联合组和GM-CSF组大鼠于模型结束后皮下注射GM-CSF9μg/kg,联合组同时腹腔注射5×104 MSCs,MSCs组腹腔往射5×104 MSCs,对照组仅注射相同容积的PBS.空气环境下再饲养3 d.肺组织病理学榆测其辐射状肺泡计数(RAC);支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数榆测其白细胞,并进行细胞分类计数;ELISA法检测其肺组织匀浆TNF-α、GM-CSF水平.免疫组织化学法观察BrdU阳性细胞分布情况.结果 1.4组RAC,BALF中白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞.肺组织匀浆TNF-α、GM-CSF水平比较均有统计学差异(F:14.59 P=0.000,F=5.65 P=0.004,F=3.11 P=0.042,F=26.31 P:0.000,F=73.65 P:0.000,F:43.91 P=0.000).与对照组比较,其他3组RAC值均明显增加(Pa<0.05)、TNF-α水平均下降(Pa<0.05);GM-CSF组和联合组白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞计数减少,GM-CSF水平增加(Pa<0.05),而MSCs组和对照组比较均无统计学差异(Pa<0.05).2.免疫组织化学显示联合组及MSCs组可见BrdU染色阳性细胞,联合组Br-dU积分高于MSCs组[(1.85 ±0.33) vs (1.04±0.18)分,t=6.09 P=0.000].结论 GM-CSF、MSCs对高氧暴露引起的新生大鼠肺损伤均具有保护作用,可能与抑制损伤部位的炎性反应有关,而联合治疗具有协同作用.