和厚朴酚对PM2．5暴露哮喘小鼠呼吸道炎症的影响及其机制

摘要

目的探讨和厚朴酚对细颗粒物（PM2.5）所致哮喘小鼠呼吸道炎症是否具有保护作用及其作用途径。方法将50只雌性无特殊病原菌（SPF）级Balb/c小鼠按随机数字表法分为5组，每组10只。A组：正常对照组；B组：哮喘模型组；C组：PM2.5暴露哮喘组；D组：TAK-242组；E组：和厚朴酚组。采用卵清蛋白（OVA）致敏并激发建立哮喘小鼠模型，B～E组第0天和第7天经小鼠腹腔注射100 mg/L OVA和氢氧化铝混合液0.1 mL致敏，第14天至第21天，以10 g/L OVA 9 g/L盐水溶液雾化30 min激发；C～E组从首次雾化第1天开始到末次激发气管注入PM2.5激发，隔日1次，共4次；在此基础之上，D组给予TAK-242腹腔注射处理，E组给予和厚朴酚灌胃处理。A组小鼠，以9 g/L盐水代替OVA同步进行实验。末次激发24 h后麻醉并解剖小鼠，左肺进行肺泡灌洗留取肺泡灌洗液（BALF）进行炎性细胞总数及分类计数；取右肺行HE染色、病理学检查；实时荧光定量PCR分析技术检测小鼠外周血单个核细胞（PBMCs）中Toll样受体4（TLR4）和核因子κB（NF-κB）mRNA的表达，流式细胞仪检测Th17和Treg细胞的表达。结果与A组比较，B组及C组小鼠支气管黏膜上皮细胞变形、脱落，上皮增生变厚，肺泡壁充血水肿，管腔内黏液分泌增加，肺部炎性细胞浸润，C组较B组更为明显，而E组小鼠呼吸道炎症明显减轻；B组及C组BALF中炎性细胞总数分别为（16.79±5.62）×10^8/L和（24.58±13.46）×10^8/L，嗜酸性粒细胞比例为0.113 8±0.022 3和0.197 8±0.084 9，均显著高于A组[（4.15±1.35）×10^8/L、0.012 0±0.002 3]，差异均有统计学意义（均P〈0.05）；E组BALF中炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞比例[（8.56±3.28）×10^8/L）、0.041 5±0.013 5]与C组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）；B组及C组PBMCs中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达分别为1.85±0.56、1.82±0.28和2.97±0.41、2.83±0.32，均显著高于A组（1.06±0.19、1.08±0.17），差异均有统计学意义（均P〈0.05）；E组PBMCs中TLR4 mRNA和NF-κB mRNA的表达（1.60±0.28、1.54±0.25）与C组比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）；B组及C组PBMCs中Th17细胞的表达水平分别为（2.89±0.61）%、（4.96±0.27）%，均显著高于A组[（1.03±0.35）%]，差异均有统计学意义（均P〈0.05）；E组PBMCs中Th17细胞的表达[（1.83±0.23）%]明显低于C组，差异有统计学意义（P〈0.05）；B组及C组PBMCs中Treg细胞的表达分别为（4.96±0.35）%、（2.27±0.41）%，均显著低于A组[（7.37±0.56）%]，差异均有统计学意义（均P〈0.05）；E组PBMCs中Treg细胞的表达[（6.45±0.38）%]明显高于C组，差异有统计学意义（P〈0.05）；D、E组情况较B组及C组明显改善。结论和厚朴酚能减轻PM2.5暴露哮喘小鼠的呼吸道炎症，其作用机制与下调TLR4、NF-κB表达和调节Th17及Treg细胞平衡有关。