利用合成多位点突变aveC*基因提高多拉菌素工业菌株中有效活性组份的含量

摘要

目的 合成多位点突变的aveC*基因用于提高除虫链霉菌工业菌株产生多拉菌素(CHC-B1)组份的含量.方法 利用相互重叠的引物进行PCR扩增,合成多位点突变的aveC*基因.利用PCR打靶技术获得aveC*基因发生置换的突变株.结果 用32条引物进行PCR扩增,获得了10个位点突变的aveC*基因.构建了打靶载体pFX-HA,在基因组上将aveC*基因原位替换成了aveC*基因.所获得的突变株LF2发酵产生多拉菌素组份的纯度由出发菌株的25％提高到93％,发酵效价达到691.5mg/L.结论 除虫链霉菌工业菌株基因组中原位替换的多位点突变的aveC*基因可以大幅度提高多拉菌素组份的含量,降低工业提取纯化的成本.