微囊藻毒素-LR对猪体外成熟卵母细胞氧化损伤与凋亡的影响

摘要

旨在探讨微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对体外成熟猪卵母细胞的毒性损伤及其潜在损伤机制.本研究从屠宰场所获得的猪卵巢中收集GV期卵母细胞,将其随机分为4组,在卵母细胞体外成熟培养液中分别添加0、20、40和60μg? mL-1 MC-LR,研究MC-LR对卵母细胞第一极体(Pbl)排出、纺锤体结构以及细胞内活性氧(ROS)、早期凋亡蛋白(Annexin V)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响,并采用RT-qPCR分析氧化应激和凋亡相关基因SOD1、SOD2、CA T、GSH-Px、Bax和Bcl2 mRNA的表达变化情况,试验重复3次.结果发现,MC-LR处理导致猪卵母细胞PbI排出率呈浓度依赖性下降,当MC-LR添加浓度达40 μg ?mL-1以上时,卵母细胞成熟率极显著下降(P＜0.01),且纺锤体结构异常率极显著升高(P＜0.001);进一步研究发现,MC-LR处理后卵母细胞ROS水平极显著升高(P＜0.01),而GSH-Px活性极显著降低(P＜0.01),并伴随着抗氧化相关基因SOD1、CA T及GSH-Px mRNA表达极显著下调(P＜0.01);细胞凋亡检测表明,MC-LR处理可导致卵母细胞早期凋亡率极显著增加(P＜0.01),凋亡相关基因Bax/Bcl2比值极显著升高(P＜0.001).研究结果表明,MC-LR可诱导猪卵母细胞纺锤体结构异常,并引发氧化损伤与细胞凋亡,最终导致卵母细胞成熟能力下降.