KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响

摘要

旨在探讨KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响.本研究在体外成熟液中添加不同浓度的KDM1A特异性抑制剂GSK-KDM1A,牦牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外培养24 h后,观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况;利用免疫荧光检测体外培养过程中卵母细胞内KDM1A的表达模式;采用实时荧光定量PCR检测体外培养卵母细胞内Kdm1a、Oct-4、Sox-2以及Nanog的表达水平;体外培养成熟后的牦牛卵母细胞进行体外受精,观察其卵裂率与囊胚形成率.结果 显示,体外培养24 h后,GSK-KDM 1A组的卵丘细胞扩展程度显著低于对照组(P＜0.05),而320 nmol·L-1组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率均显著低于160 nmol·L-1组(P＜0.05).在卵母细胞体外成熟过程中,Kdm1a呈现动态表达模式,MⅠ期的表达水平显著低于GV和MⅡ期(P＜0.05);添加GSK-KDM 1A能显著抑制卵母细胞中KDM1A蛋白的表达(P＜0.05),320nmol·L-1组各时间点KDM1A的表达量均显著低于160nmol·L-1组(P＜0.05).GSK-KDM1A组卵母细胞内Oct-4与Sox-2的表达水平显著高于对照组(P＜0.05),但Nanog的表达水平无显著差异(P＞0.05).牦牛卵母细胞体外成熟后,GSK-KDM1A组的卵裂率显著低于对照组(P＜0.05),但囊胚形成率无显著变化(P＞0.05).综上表明,KDM1A参与调控牦牛卵母细胞减数分裂成熟过程,GSK-KDM1A能有效抑制KDM1A的表达,影响卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能,揭示KDM 1A在此过程中扮演重要角色.