CpxR对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因pmrB和phoQ调控作用的研究

摘要

为了探索cpxR对鼠伤寒沙门菌的黏菌素耐药相关基因pmrB和phoQ的调控作用,用overlapping PCR扩增得到cpxR、pmrB和cpxR、phoQ共表达基因cpxR-pmrB、cpxR-phoQ,用2倍微量肉汤稀释法对构建的pmrB、phoQ单基因过表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/ppmrB (JS△△/pB)、JS△acrB△cpxR::kan/pphoQ (JS△△/pQ)和cpxR-pmrB、cpxR-phoQ共表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-pmrB (JS△△/pRB)、JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-phoQ(J S△△/pRQ)进行黏菌素最小抑菌浓度(MICs)的测定,同时以各菌株在LB中的OD600nm值绘制生长曲线,以各菌株在不同浓度的黏菌素中的存活率绘制杀菌曲线.结果:成功构建的鼠伤寒沙门菌pmrB、phoQ的单基因过表达菌株JS△△/pB、JS△△/pQ和cpxR-pmrB、cpxR-phoQ共表达菌株JS△△/pRB、JS△△/pRQ的MIC结果显示,JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较JS下降93.75％,与本实验室前期研究结果一致.JS△△/pB、JS△△/pQ的MIC值较JS均上升3倍,而JS△△/pRB、JS△△/pRQ的MIC值较JS分别降低50％和75％.生长曲线结果显示JS△△/pR的生长活性最低,JS△△/pB、JS△△/pQ、JS△△/pRB和JS△△/pRQ的生长活性均低于JS△acrB△cpxR::kan/pHisA(JS△△/pHisA).黏菌素的杀菌曲线结果显示JS△△/pB和JS△△/pQ在不同浓度的黏菌素中的存活率显著高于黏菌素较敏感的JS△△/pRB和JS△△/pRQ.上述结果表明:CpxR能够通过PmrB和PhoQ调控鼠伤寒沙门菌对黏菌素的敏感性.