猪细胞因子cDNA表达文库的构建及其基因的克隆鉴定

摘要

为克隆和研究猪细胞因子及相关基因,应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库.采取健康猪外周血及淋巴结,分离单个核细胞,经LPS+PHA联合刺激不同时间后,提取总RNA.将各组样品混合,分离纯化mRNA.反转录合成cDNA第一链和第二链,与EcoRI和HindⅢ接头连接.酶切和过柱分级分离后,与λScreen载体连接,经体外包装转染E. coli ER1647宿主菌,进行文库容量测定和扩增.以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆猪IL-2和IL-4的cDNA并进行测序.结果表明,成功构建了猪细胞因子cDNA文库,文库原始库容量为8×105,插入片段在300～2 000 bp,扩增得到特定的IL-2和IL-4基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具.