外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活MAPK信号通路的分析

摘要

旨在深入探究外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)囊膜蛋白(Env)的致病机制,通过组织病理学观察和免疫组织化学染色,检测病肺的病理特征以及Env、EGFR和MAPK信号通路中p Erk1/2和p p38的阳性表达区,通过Western blot检测Erk1/2和p38在病肺中的磷酸化水平.转染重组表达质粒pcDNA 4/myc-His /exJSRV-env到A549细胞中,通过Western blot检测Erk1/2和p38的磷酸化水平.通过CCK-8法检测转染重组表达质粒的A549细胞的增殖活力.免疫组化结果显示:JSRV Env蛋白主要表达于病肺组织的肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR在病肺组织中过表达于肺泡上皮细胞,脱落的肿瘤细胞及间质细胞中,而在健康绵羊肺中只是少量表达于肺泡上皮细胞和支气管上皮细胞中,p Erk1/2和p-p38在病肺组织中主要表达于肺泡上皮细胞和肿瘤细胞,EGFR、p Erk1/2和p-p38的阳性表达区均与Env蛋白的阳性表达区一致.Western blot结果显示:病肺中p-Erk1/2和p p38的磷酸化水平均极显著高于健康肺组织,转染重组表达质粒pcDNA4/myc His/exJSRV-env的A549细胞中p-Erk1/2和p p38的表达量均极显著高于对照组细胞,说明exJSRV-env确实激活了A549细胞的MAPK通路.而CCK8结果显示:转染重组表达质粒pcDNA4/myc-His/exJSRV-env的A549细胞增殖活力显著高于对照组细胞,说明exJSRV-env可能是通过激活的EGFR/MAPK通路促进A549细胞的恶性增殖,进而促使肿瘤的发生.本研究为进一步探索绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白的致病机制奠定了基础.