小尾寒羊间情期和发情期microRNAs差异表达分析

摘要

本研究通过构建和分析小尾寒羊间情期和发情期卵巢组织microRNA (miRNA)表达谱,筛选两个时期差异表达的microRNAs,为研究microRNA调控小尾寒羊繁殖过程提供相应的理论基础.利用活体手术法在发情期(第1天)和间情期(第13天)分别采集一侧卵巢.从卵巢中提取总RNA,利用illumina Hiseq2000测序平台获取RNA数据,对表达谱和差异表达microRNAs进行生物信息学分析.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的microRNAs在小尾寒羊卵巢中表达水平.结果,成功地构建出小尾寒羊间情期和发情期microRNA的表达谱,oar-miR 99a和oar-miR 143分别是间情期和发情期表达量最高的microRNA,并筛选出在两个时期间3个显著差异表达的microRNAs,分别为oar-miR-200a、oar-miR 200b和oar-miR 200c.利用qRT-PCR对随机选择的2个显著差异表达的microRNAs进行验证,其表达水平和RNA-Seq分析结果一致.microRNA表达谱为后续的绵羊卵巢microRNA研究提供更详尽的信息.结合靶基因预测及通路富集分析,推测差异表达的microRNAs是通过代谢和免疫途径调控卵巢周期性活动.