BMPR-IB基因的克隆及其在绒山羊成纤维细胞中的表达

摘要

本研究旨在克隆BB基因型小尾寒羊的BMPR-IB基因编码区,构建重组载体,瞬时转染绒山羊成纤维细胞,并对BMPR-IB等基因的表达情况进行检测.采用RT-PCR方法扩增BMPR-IB基因完整编码区,构建真核表达载体pEGFP-BMPR-IB,经脂质体Lipofectamine LTX&PLUS介导转染绒山羊成纤维细胞,并分别于转染后48和72 h收集细胞,分别提取RNA和蛋白,利用RT-PCR和Western blot方法检测相关基因的表达情况.结果扩增得到了包含BMPR-IB基因完整编码区全长在内的1 550 bp片段,与已知序列高度同源;Real-time PCR检测结果均表明,转基因组细胞中BMPR-IB表达量显著高于空白对照组(P＜0.01),IGF-Ⅰ基因表达量也显著上调(P＜0.01),TLR4、IFN、MHC、PNRP、GDF5、INH基因的表达量显著降低(P＜0.01);Western blot检测表明,转染组BMPR-IB、IGF-Ⅰ的表达有所增加,BMP4、TLR4的表达略有降低,但差异均不显著(P＞0.05).本研究成功实现了小尾寒羊BMPR-IB基因在山羊成纤维细胞中的表达,为转BMPR-IB基因阳性细胞株和细胞系的建立提供了基础;研究表明BMPR-IB(BB型)基因的过表达能上调IGF-Ⅰ基因的表达,下调TLR4基因的表达.