含CpG-ODN基序重组抑制素质粒的构建及其对小鼠颗粒细胞相关凋亡基因表达的影响

摘要

旨在构建含免疫基序CpG-ODN片段的重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN,并研究其对小鼠颗粒细胞中相关凋亡基因mRNA表达水平的影响,以探讨免疫佐剂CpG-ODN对小鼠卵巢颗粒细胞的作用.采集21～23日龄雌性ICR小鼠卵巢颗粒细胞,试验分为3组:空载体组(pEGFP)、抑制素重组质粒组(pEGISI)和含CpG-ODN基序的重组抑制素质粒组(pEGISI-CpG-ODN).采用普通PCR扩增目的片段CpG-ODN,荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染后细胞中CpG及死亡受体通路相关基因(Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Cas pase8和Caspase3)mRNA的表达水平.结果表明:重组抑制素质粒pEGISI-CpG-ODN构建成功;重组抑制素质粒(pEGISI-CpG-ODN)转染颗粒细胞后,CpG基因能在细胞中高表达;与pEGISI组相比,pEGISI-CpG-ODN组转染颗粒细胞后,能极显著降低细胞中促凋亡基因Fas、FasL、DR4/5、TRAIL、Cas pase8和Caspase3 mRNA的表达水平(P＜0.01).综上表明,CpG-ODN可拮抗抑制素的作用,下调小鼠颗粒细胞中凋亡基因的表达,进而影响卵泡发育.