长白猪PPARα、PPARγ基因的克隆、表达及生物信息学分析

摘要

本研究旨在克隆长白猪过氧化物酶体增殖剂激活受体(Peroxisome Proliferators-Activated Receptors, PPARs)α和γ基因,分析其生物信息学特征并探究其在不同组织中的表达规律.参照GenBank数据库中猪PPARα(登录号:NM_001044526)、PPARγ(登录号:NM_214379.1)序列设计引物,以6月龄长白猪为实验对象,采用PCR技术扩增基因序列并与pcDNA-3.1载体连接,随后转化至DH5α感受态细胞中,挑取单菌落.通过实时荧光定量PCR技术检测长白猪心脏、肝脏等12种不同组织中2种基因的mRNA表达水平.结果显示:长白猪PPARα基因CDS序列为1 407 bp,编码468个氨基酸;长白猪PPARγ基因CDS序列为1 515 bp,编码504个氨基酸;2种蛋白属同一个家族,主要二级结构为α螺旋和无规卷曲,不含跨膜区域,为亲水蛋白,亲缘关系分析发现2种蛋白较保守;实时荧光定量PCR检测发现,PPARα在长白猪肝脏中表达量最高,在脾脏中表达量最低,PPARγ在长白猪脂肪组织中表达量最高,胃中表达量次之,该结果提示2种基因在长白猪能量代谢尤其糖脂代谢中发挥重要功能.