慢病毒介导的siRNA对1型鸭肝炎病毒复制的抑制作用

摘要

为探索RNAi技术在鸭病毒性肝炎防控中的作用,本研究将筛选出的沉默RdRp效果较好的shRNA1、shRNA2和突变体shRNA-NC分别插入pPLK/GFP/+Puro载体,构建慢病毒载体pPLK-shRNA-RdRp-1、pPLK-shRNA-RdRp-2、pPLK-shRNA-NC,制备重组慢病毒Lenti-shRNA-RdRp-1、Lenti-shRNA-RdRp-2、Lenti-shRNA-NC;将重组慢病毒单独或者联合接种鸭胚成纤维细胞后感染DHAV-1,应用荧光定量PCR的方法检测感染DHAV-1的鸭胚成纤维细胞上RdRp基因的表达量及病毒TCID50,判断siRNA对病毒及病毒基因的抑制作用,并进一步将结果在鸭胚上进行检测.结果显示,Lenti-shRNA-RdRp-1、Lenti-shRNA-RdRp-2、Lenti-shRNA-RdRp-1+2均能较好的抑制RdRp基因的表达,病毒感染后72 h,三组的抑制效率均在95％以上,且在鸭胚中也能较好抑制DHAV-1的增殖,为鸭病毒性肝炎的防控提供了新思路和方向.